Cara Inaktivasi Virus

Perbedaan virus setelah inaktifasi

Inaktivasi Virus adalah bertujuan untuk mematikan daya pathogenitas virus tetapi tidak merusak sifat antigenitasnya, sehingga ketika virus/antigen dimasukan ke tubuh target, virus tersebut tidak menyebabkan  sakit tetapi tetap mampu merespon terbentuknya kekebalan (antibodi)
Berikut beberapa chemical dan prosedur proses inaktifasi virus  yang umum dipergunakan dalam proses inaktifasi virus dalam memproduksi  vaksin hewan dilengkapi dengan link journalnya


1. Formalin
  • Virus ND
Konsentrasi : 0,04 – 0,1%, Inkubasi 37˚C : 16 jam
American Association of Avian Pathologists : http://www.jstor.org/stable/1591214
Evaluation of Different Methods of Inactivation of Newcastle Disease Virus and Avian Influenza Virus in Egg Fluids and Serum

Konsentrasi : 0,04 %, Inkubasi 37˚C : 24 jam
Veterinary Research Communications, 12 (1988) 195-197 Geo Abstracts Ltd, Norwich-printed in England : https://eurekamag.com/pdf/001/001517990.pdf
A Premliminary Vaccine Potency Trial of A Newcastle Disease Virus Inactivated with Binary Ethylenimine

Konsentrasi : 0,025 %, 0,025 %, Room temperature (20 ˚C) 1 hari
NCBI-NIH
Inactivation of haemagglutinin and infectivity of influenza and Newcastle disease viruses by heat and by formalin


Konsentrasi : 0,1%, Inkubasi 37˚C : 16 jam
Immunogenicity of commercial , formaldehyde and binary ethylenimine inactivated Newcastle disease virus vaccines in specific pathogen free chickens
  • Virus AI H5N1
Konsentrasi : 0,04 – 0,1%, Inkubasi 37˚C : 16 jam
American Association of Avian Pathologists
Evaluation of Different Methods of Inactivation of Newcastle Disease Virus and Avian Influenza Virus in Egg Fluids and Serum

  • Virus AI H9N2

Konsentrasi : 0.1%, Inkubasi 20°C 10 jam
An_inactivated vaccine to control the current H9N2 low pathogenic avian influenza in Korea

Konsentrasi : 0,02%, Inkubasi 37°C 18 jam
Antigenic evolution of H9N2 chicken influenza viruses isolated in China during 2009–2013 and selection of a candidate vaccine strain with broad cross-reactivity

Konsentrasi : 0.025%, Inkubasi 4°C minimal 1 minggu
Vaccine Efficacy of Inactivated, Chimeric Hemagglutinin H9/H5N2 Avian Influenza Virus and Its Suitability for the Marker Vaccine Strategy

Konsentrasi : 0,1%, Inkubaasi 4°C, 24 jam
Assessment of the safety and efficacy of low pathogenic avian influenza (H9N2) virus in inactivated oil emulsion vaccine in laying hens

Konsentrasi : 0.12%, Inkubasi 37°C, 48 jam
Advacements in life Science: http://www.als-journal.com/427-17/:
Comparative efficacy of different adjuvant containing inactivated vaccines against low-pathogenicity Avian InfluenzaH9N2 virus

Konsentrasi : 0,04 – 0,1%; Inkubasi 37°C, 16 jam atau 48 jam
Evaluation of different inactivation methods for high and lowpathogenic avian influenza viruses in egg-fluids for antigenpreparationShailesh

Konsentrasi : 0.1%, Inkubasi 20°C, 10 jam
Genetic and antigenic evolution of H9N2 subtype avian influenza virus in domestic chickens in southwestern China, 2013±2016

Konsentrasi : 0.1%, Inkubasi 25°C, 24 jam
Archive Archives of Razi Institute: http://archrazi.areeo.ac.ir/article_107486_0.html
Optimizing the process of inactivating influenza virus subtype H9N2 by formalin in the production of killed avian influenza vaccine

Konsentrasi : 0.1%, Inkubasi 37°C, 18 jam
Optimizing the process of inactivating influenza virus subtype H9N2 by formalin in the production of killed avian influenza vaccine

Konsentrasi : 0.1%, Inkubasi 25°C 18 jam
Preparation and Evaluation of H9N2 Vaccine Adjuvated with Montanide ISA71 VG
  • Virus IB
Konsentrasi : 1:1000, Inkubasi 4˚C : 16 jam sambil disteerer
RESPON ANTIBODI DAN PROTEKSI VAKSIN INAKTIF INFECTIOUS BRONCHITIS ISOLAT LOKAL PADA AYAM PETELUR
BBalitvet
  • Virus IBD
Konsentrasi : 0.1 - 0.2%. Inkubasi 37 °C : 24 jam
Journal of Zhejiang University SCIENCE B : http://citeseerx.ist.psu.edu/viewdoc/download;jsessionid=9FBB35D7181AFAEB9111F401C8C7FC91?doi=10.1.1.521.9759&rep=rep1&type=pdf
Immunogenicity of formaldehyde and binary ethylenimine inactivated infectious bursal disease virus in broiler chicks*

2. BPL (Beta-propiolakton)

  • Virus ND
Konsentrasi : 0,025 – 0,1%, Inkubasi 4˚C : 18 jam kemudian Inkubasi 37˚C : 30 menit
American Association of Avian Pathologists : http://www.jstor.org/stable/1591214
Evaluation of Different Methods of Inactivation of Newcastle Disease Virus and Avian Influenza Virus in Egg Fluids and Serum
  • Virus AI H5N1
Konsentrasi : 0,025 – 0,1%, Inkubasi 4˚C : 18 jam kemudian Inkubasi 37˚C : 30 menit
American Association of Avian Pathologists : http://www.jstor.org/stable/1591214
Evaluation of Different Methods of Inactivation of Newcastle Disease Virus and Avian Influenza Virus in Egg Fluids and Serum

  • Virus AI H9N2

Konsentrasi : 0,1%., 38 bagian virus dikombinasikan + 1 bagian 0,5 M disodium fosfat (DSP), homoenkan, Tambahkan 1 bagian BPL (4%) Inkubasi 30 menit di atas es, diikuti oleh 2 jam inkubasipada 37 ° C untuk menghidrolisis BPL yang tersisa. PH larutan kemudian sesuaikan menjadi ~7,4 dengan 7% natrium bikarbonat. 
BMC Reseach :https://bmcresnotes.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13104-018-3537-9
Induction of immune response in chickensprimed in ovo with an inactivated H9N2 avian influenza virus vaccine

Konsentrasi : 0,1%, Inkubasi 4°C, 16 jam
Elseiver
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25997377
Evaluation of different inactivation methods for high and lowpathogenic avian influenza viruses in egg-fluids for antigenpreparationShailesh
  • Virus IB
Konsentrasi : 1:2000, Inkubasi 37˚C : 90 menit sambil disteerer
American Association of Avian Pathologists : http://www.jstor.org/stable/1588835
Avian Infectious Bronchitis Virus: Serologic Response of Chickens to Seven Beta-Propiolactione-Inactivated Strains

Konsentrasi : 0,025%, Inkubasi 37˚C : 2 jam sambil disteerer
American Association of Avian Pathologists : http://www.jstor.org/stable/1588835
Avian Infectious Bronchitis Virus: Serologic Response of Chickens to Seven Beta-Propiolactione-Inactivated Strains

Konsentrasi : 0,05%, Inkubasi 37˚C : 1,5 jam sambil disteerer
Arc". Raz; Ins. 56 (2003) 13-35: http://archrazi.areeo.ac.ir/article_109025_455d22bbc2a9b8ce0b3a779d4ca92b20.pdf
Efficacy of Experimental Inactivated Vaccine for Infectious Bronchitis Disease

 3. BEI (Binary Ethylenimine)
  • Virus ND
Konsentrasi : 0,01 M, Inkubasi 37˚C : 5 - 8 jam
American Association of Avian Pathologists : http://www.jstor.org/stable/1591214
Evaluation of Different Methods of Inactivation of Newcastle Disease Virus and Avian Influenza Virus in Egg Fluids and Serum

Konsentrasi : 0,001 M, Inkubasi 37˚C : 24 jam
Research Gate : https://www.researchgate.net/publication/233231064
_Avian_Influenza_Virus_H5N1_Inactivation_by_Binary_Ethylenimine/download Avian Influenza Virus (H5N1) Inactivation by Binary Ethylenimine

Konsentrasi : 4 mM, Inkubasi 30˚C : 21 jam
Semantic Scholar : https://www.semanticscholar.org/paper/Immunogenicity-of-commercial-%2C-formaldehyde-and-in-Toroghi-Babaei/21f4f22022c582eacf3c8a6fe71a863cd363e2f6
Immunogenicity of commercial , formaldehyde and binary ethylenimine inactivated Newcastle disease virus vaccines in specific pathogen free chickens

Konsentrasi : 0.001 M (1% v/v).
Veterinary Research Communications, 12 (1988) 195-197 Geo Abstracts Ltd, Norwich-printed in England : https://eurekamag.com/pdf/001/001517990.pdf
A Premliminary Vaccine Potency Trial of A Newcastle Disease Virus Inactivated with Binary Ethylenimine

Konsentrasi : 4 mM, Inkubasi 30˚C : 21 jam
Razi Vaccine & Serum Research Institute ; https://www.semanticscholar.org/paper/Immunogenicity-of-commercial-%2C-formaldehyde-and-in-Toroghi-Babaei/21f4f22022c582eacf3c8a6fe71a863cd363e2f6
Immunogenicity of commercial , formaldehyde and binary ethylenimine inactivated Newcastle disease virus vaccines in specific pathogen free chickens
  • Virus AI H5N1
Konsentrasi : 0,01 M, Inkubasi 37˚C : 5 - 8 jam
American Association of Avian Pathologists : http://www.jstor.org/stable/1591214 Evaluation of Different Methods of Inactivation of Newcastle Disease Virus and Avian Influenza Virus in Egg Fluids and Serum
  • Virus IBD
Konsentrasi : 0,001 - 0,002 mol / L,  0,1 mol/L 2-bromoethylamine hydrobromide larutkan kedalam 0.175 mol/L NaOH, inkubasi di at 37°C 1 jam, Masukan campuran larutan diatas 1 s/d 2 % ke dalam virus, inkubssi di 37°C 36 jam, Residu BEI dihidrolisis dengan menambahan larutan 1 mol / L steril Na-tiosulfat 10% dari volume BEI yang digunakan
Journal of Zhejiang University SCIENCE B : http://citeseerx.ist.psu.edu/viewdoc/download;jsessionid
=9FBB35D7181AFAEB9111F401C8C7FC91?oi=10.1.1.521.9759&rep=rep1&type=pdf
Immunogenicity of formaldehyde and binary ethylenimine inactivated infectious bursal disease virus in broiler chicks*

Nah itulah artikel mengenai inaktifasi virus sebagai referensi  untuk melakukan optimasi inaktifasi virus skala produksi

Untuk mendapatkan artikel/journal-journal yang ada dalam tabel diatas, silahkan baca artikel "cara amudah download artikel/journal berbayar" karena tidak semua journal dapat diakses dengan lengkap atau bahkan kita harus membelinya

 Dan untuk proses pengujian inaktifasinya silahkan baca "cara uji inaktivasi virus"

Semoga bermanfaat dan silahkan share...….
Diposting oleh No comments:
Marcadores:

Uji Tantang Vaksin ND Kill dan Aktif

Uji Tantang adalah salah satu syarat yang harus dilakukan sebelum vaksin Newcastle Disease (ND) dipasarkann, Hewan target yang digunakan dalam uji tantang ini menggunakan ayam SPF (Specific Pathogen Free). Tujuan uji tantang adalah untuk mengukur protektifitas vaksin tersbut terhadap seed virus tantang ND, adapun stndar pengujiannya  mengacu pada Farmakope Obat Hewan Indonesia (FOHI)
PA ND, Pathologi Anatomi virus ND

1. Uji Potensi Vaksin ND aktif

  • Ayam yang dipergunakan untuk uji petensi Vaksin ND Aktif  berumur 30-35 hari sebanyak 20 ekor yang di bagi menjadi 2 kelopok masing-masing 10ekor sebagai kelompok vaksinasi dan 10 ekor lainnya sebagai kelompok kontrol.Kelompok vaksinasi di suntik/vaksin dengan 1 dosis/ekor dengan tetes mata/hidung. Cara membuat 1 dosis vaksin ND aktif silahkan baca artikel "Cara Uji Kandungan Virus ND dengan Telur Berembrio" point pengenceran virus. Dan cara membuat larutan PBS silahkan baca artikel "Prosedur Pembuatan PBS"
  • Pengamatan dilakukan selama 14 hari post vaksinasi

2. Uji Potensi Vaksin ND Inaktif

  • Ayam yang dipergunakan untuk uji petensi ND Kill berumur 30-35 hari sebanyak 20 ekor yang di bagi menjadi 2 kelopok masing-masing 10ekor sebagai kelompok vaksinasi dan 10 ekor lainnya sebagai kelompok kontrol.
  • Kelompok vaksinasi di suntik/vaksin dengan 1 dosis/ekor vaksin ND Inaktif melalui intramuskuler.
  • Ayam kelompok kontrol tidak divaksin..
  • Observasi setiap hari dan catat di form uji potensi, pengamatan selama 14 hari

3. Uji Tantang


  • Sebelum ayam di uji tantang terlebih dahulu diambil darahnya untuk mengecek titer antibodi. 
  • Mengukur titer antibodi silahkan baca artikel "Cara Mengukur Titer Antibdi dengan Metode HI" 
  • Pengambilan darah pada ayam silahkan baca artikel "Teknik Pengambilan darah pada Hewan"
  • Empat belas  hari setelah vaksinasi, semua ayam dari kelmpok vaksinasi dan kelompok kontrol ditantang dengan  virus tantang (ND-SATO) melalui intramuskuler dengan kandungan virus 104.0 CLD50 atau 105.0 EID50. Cara menguji kandungan virus silahkan baca artikel "Cara menguji Kandungan Virus ND"
  • Catat semua gejala yang teramati pada form uji potensi ND.
  • Pengamatan dilakukan selama 14 hari.
  • Vaksin memenuhi syarat apabila selama pengamatan (post uji tantang) minimum 90% ayam dari kelompok vaksinasi hidup tanpa ada  gejala penyakit ND dan 100% ayam kontrol mati
  • Ayam dengan titer antibodi minimal 24 memberikan hasil protektif.

3. Daftar Fustaka

  • Farmakope Obat Hewan Indonesia (FOHI) tahun 2013
  • The World Organization for Animal Health (OIE)
Semoga bermanfaat........ Silahkan disahre
Diposting oleh No comments:
Marcadores:

Cara Mudah Download Artikel dan Journal Berbayar

Postingan ini sengaja saya buat untuk para pelajar, mahasiswa, karyawan  atau para peneliti yang memerlukan artikel atau journal sebagai bahan referensi awal untuk memulai penelitiannya. Masalahnya sering kita kesulitan mengakses artikel/jornalnya tersebut karena kita harus mengeluarkan dana untuk membelinya, banyak  journal yang hanya menampilkan abstraknya atau kita hanya bisa mebaca saja  sementara journal lengkapnya kita harus mengeluarkan uang. Tapi jangan kawatir atau berputus asa bagi yang tidak cukup uang untuk membelinya, kerena kita bisa mencoba mengakses link berikut ini  https://sci-hub.tw/ atau  https://sci-hub.se/



Nah berikut cara lengkapnya
1. Akses link diatas
2. Setelah muncul/terbuka link nya seperti gambar dibawah ini

 3. Masukan url (alamat website) atau PMID atau DOI dengan cara mengcopy dan paste kan di kolomnya (setiap journal biasanya selalu mencantumkan PMID atau DOI)
4. Klik "open"
5. Maka akan muncul gambar berikut ini

6. Pada kotak kosong dibawahnya masukan kode yang muncul kemudian klik kotak dibawahnya (maaf ya saya tidak mengerti bahasanya kemungkinan enter)
7. Tunggu sampai SCI-HUB mengkases
8. Setelah muncul journalnya kita simpan journal tersebut  dengan cara klik kanan kemudian "save as"

Keterangan : 
Tidak semua journal bisa di akses dengan link  SCI-HUB ini, sehingga kita bisa coba dengan cara lain misalnya dengan menyalin judul artikelnya kemudian cari dengan mbah google karena satu journal  ada di publish oleh beberapa website 

 Semoga bermanfaat…... silahkan di share
Diposting oleh No comments:
Marcadores:

Avian Influenza (Flu Burung) dan Perkembangannya


Flu Burung
Virus Avian Influenza
Avian Influenza atau dikenal juga dengan Flu Burung adalah salah satu penyakit dari 25 penyakit hewan menular strategis yang ditetapkan pemerintah dengan Keputusan Menteri Pertanian Nomor 4026/Kpts/OT.140/4/2013 . Keputusan ini diambil karena penyakit ini perlu pengendalian dan penanggulangan yang komprehensip disemua stekholder karena Avian Infulenza (AI/Flu Burung) dapat menyebabkan kerugian ekonomi  yang besar dengan ditandai tingginya kematian pada  unggas, mempengaruhi kesehatan manusia dan lingkungan, menimbulkan  keresahan masyarakat. Virus ini memiliki sub-tipe yang dibagi berdasarkan permukaannya yaitu Hemaglutinin (HA) dan Neuraminidase (NA), yang terbagi menjadi 16 sub-tipe H dan 9 sub-tipe N. Adapun sifat dari virus Avian Influenza adalah dapat hemaglutinasi sel darah merah unggas, dapat bertahan hidup di air sampai 4 hari pada suhu 22ºC, lebih dari 30 hari pada suhu 0ºC, virus akan mati pada pemanasan 60°C selama 30 menit atau 56°C selama 3 jam.

Avian Influenza H5N1 Clade 2.1 (2.1.3.2)

Avian Influenza/Flu burung  yang menyerang unggas pertama kali dilaporkan pada tahun 2003 dan sampai dengan saat ini telah menyebar di seluruh provinsi dengan strain H5N1 clade 2.1 dan tergolong HPAI (Highly  Patogenic  Avian  Influenza), sedangkan pada manusia dilaporkan pada tahun 2005.  Gejala klinis virus Avian Influenza HPAI pada ayam ditandai dengan ayam terlihat lesu, napsu makan menurun, kematian ayam yang cukup tinggi, kadang terlihat warna kebiruan pada pial, jengger, sekitar muka, dada, tungkai atau telapak kaki. Tingkat homologi (susunan asam amino) dari ayam tahun 2003 dan tahun 2006 antara isolat virus AI > 95%. Pada bulan September 2009 Ditjen Peternakan telah menerbitkan Surat Edaran (SE) dengan nomor  30099/PD.620/F/9/2009 yang menyebut 4 strain virus baru pengganti virus AI Legok dan 2 strain virus untuk uji tantang. Isolat virus tersebut adalah :

  • Virus sebagai candidat vaksin :
  1. A/chicken/Garut/BBVW-223/2007, dan
  2. A/chicken/West Java (Nagrak)/30/2007.
  • virus untuk uji tantang adalah :
  1. A/chiken/West Java-Subang/29/2007 atau dengan
  2. isolat virus A/chicken/West Java/SMI-PAT/2008

Avian Influenza H5N1 Clade 2.3 (2.3.2.1)

Akhir Tahun 2012 dunia perunggasan Indonesia di kejutkan dengan munculnya wabah Flu Burung yang menyerang peternakan bebek/itik di sejumlah daerah di Indonesia yang disebabkan oleh virus Avian Influenza H5N1 clade 2.3.2.1 atau yang populer dengan sebutan AI H5N1 clade 2.3. virus ini kemudian menyerang peternakan ayam yang tersebar disebagian besar  wilayah Indonesia yang diperkuat dengan hasil kajian Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian (Balitbangtan) melalui Balai Besar Penelitian Veteriner (Bbalitvet) sehingga kementrian pertanian melalului Dirjen Peternakan dan Kesehatan Hewan membuat surat edaran nomor : 06042/PD.610/F/12/2012 tentang Pengendalian Penyakit AI pada Itik
Reservoir alami utama dari virus influenza adalah burung pantai (liar maupun yang telah didomestikasi) dan unggas air   (SWAYNE dan HALVORSON). Gejala klinis pada unggas ini tidak terlihat, tetapi hewan tersebut mungkin mengeluarkan virus (shedding) melalui feses untuk jangka waktu yang lama dan unggas tersebut mungkin juga terinfeksi lebih dari satu subtipe serta sering tidak menunjukkan respon antibodi. Yang dianggap sebagai reservoar genetik dari semua virus Avian Influenza. adalah dari ordo Charadriiformes (burung pantai, camar) dan Anseriformes (bebek dan angsa).

Untuk pengendalian penyakit Avian Influnza/Flu burung H5N1 clade 2.3 maka pemerintah menetapkan virus yang dijadikan sebagai bahan vaksin adalah :

1.  A/DUCK/Sukoharjo/BBVW1463-9/2012 : Seed vaksin H5N1 clade 2.3 
2. A/DUCK/Sleman/BBVW 1463-10/2012 : Seed Tantang
Avian Influenza H9N2

 Pada awal tahun 2017 dunia peternakan Indonesia dihebohkan dengan munculnya Avian Influenza/Flu burung dengan type yang berbeda dengan sebelumnya yaitu H9N2 yang termasuk golongan LPAI karena dari Hasil sekuensing bahwa virus ini memiliki 'mono basic amino acid'. Data filogenik menunjukkan bahwa HA-H9 dan NA-N2 homolog (98%) dengan virus H9N2 Vietnam (A/Muscovy duck/Vietnam/LBM719/2014) Gejala yang  muncul adalah dengan penurunan produksi telur bisa mencapai 20 - 40 persen atau bahkan bisa mencapai 60 persen dengan kematian ayam yang cukup rendah  kecuali diikuti dengan infeksi skunder. Kondisi saat ini, kasus Avian Influenza H9N2 sudah tersebar di banyak provinsi di Indonesia (Pulau Jawa, Sumatera, Kalimantan, Sulawesi dan Bali), rata-rata umur ayam yang terserang 36-60 minggu.

Menurut Kepala Sub Direktorat Pengawasan Obat Hewan Direktorat Jenderal Peternakan dan Kesehatan Hewan Drh. Ni Made Ria Isriyanti, Ph.D, perbedaan antara HPAI dan LPAI bisa dilakukan secara biologis dimana HPAI merupakan infeksi sistemik, sedangkan infeksi LPAI terlokalisasi di organ tertentu. Infeksi virus H9N2 di lapangan, hasil PA yang signifikan adalah adanya perdarahan pada organ pernafasan dan pencernaan, ditambah dengan lesi seperti ‘brokoli’ pada ovarium ayam.

Pengalaman dari beberapa peternak apabila farm tersebut terserang virus AI H9N2 sebelum divaksinasi maka produksi telur biasanya tidak bisa mencapai puncak (fix Production), tetapi jika terserangnya setelah divaksinasi vaksin AI H9N2 produksi telur bisa mencapai puncak walaupun tidak maksimal, ini menunjukan bahwan vaksinasi H9N2 sangat diperlukan.

Hasil isolasi dan karakterisasi virus Avian Influenza

Data ini dibuat sesuai spesimen (isolat) yang berhasil diisolasi dan diuji karakterisasinya dan kami tidak mengklaim  data ini mengambarkan kasus Flu Burung yang terjadi di wilayah Indonesia
Pergeseran kasus Flu Burung
  • Tahun 2015 kasus AI didominasi dengan AI H5N1 clade 2.1
  • Tahun 2016 kasus AI didominasi dengan AI H5N1 clade 2.3
  • Tahun 2017 kasus AI didominasi dengan AI H9N2 
Untuk melengkapi wawasan tentang AI/Flu Burung silahkan baca juga artikel kami dibawah ini :
Sekiranya artikel ini bermanfaat silahkan untuk dishare ........terima kasih......
Diposting oleh No comments:
Marcadores:

Uji Tantang dan Serum Neutralisasi Test Vaksin IB

virus Infectious Bronchitis pada embrio, IB, Virus IB
PA Virus IB 
Untuk mengukur protektifitas vaksin Infectious Bronchitis (IB) selain uji tantang bisa juga dengan uji Serum Neutralisasi, yaitu virus IB dinetralisasi dengan serum antibodi IB hasil vaksinasi, kemudian di inokulasikan ke telur ayam SPF (Specific Pathogen Free). Pengambilan darah dan pemisahan serumnya dilakukan dengan cara aseptik/steril 

1. Vaksinasi vaksin IB aktif

  • Ayam yang dipergunakan untuk uji petensi IB berumur 4 hari sebanyak 20 ekor yang di bagi menjadi 2 kelopok masing-masing 10 ekor sebagai kelompok vaksinasi dan 10 ekor lainnya sebagai kelompok kontrol.
  • Kelompok vaksinasi di suntik/vaksin dengan 1 dosis/ekor melalui tets mata/hidung, cara membuat 1 dosis vaksin silahkan baca artikel "Cara Uji Kandungan Virus IB (Infectious Bronchitis) dengan Telur Berembrio" point pengenceran virus.
  • Pengamatan dilakukan selama 3 minggu post vaksinasi
2. Vaksinasi Vaksin IB Inaktif
  • Ayam yang dipergunakan untuk uji petensi IB berumur 30-35 hari sebanyak 20 ekor yang di bagi menjadi 2 kelopok masing-masing 10ekor sebagai kelompok vaksinasi dan 10 ekor lainnya sebagai kelompok kontrol.
  • Kelompok vaksinasi di suntik/vaksin dengan 1 dosis/ekor.
  • Lakukan vaksinasi ke dua (Booster) 2 minggu post vaksinasi pertama.
  • Pengamatan post vaksinasi ke 2 selama 14 hari.

3. Bleeding dan Inatifasi serum

  • Pada akhir pengamatan ayam kelompok vaksinasi maupun kelompok kontrol diambil darah secara aseptik/steril, Prosedur pengambilan darah silahkan baca artikel "Teknik Pengambilan darah pada Hewan"
  • Untuk mengeluarkan serum dari darah dengan cara diinkubasi di suhu  37oC selama 1 jam atau dengan cara di sentrifus 2500 rpm 5 menit.
  • Pisah serum secara aseptik/steril dan masukan pada tabung glass.cryogenic tube, kemudain masing-masing serum dipool dengan proporsional
  • Inaktifasi serum di penangas air (waterbath) dengan suhu 56oC selama 30 menit

4. Uji Tantang

  • Tiga minggu pasca vaksinasi untuk vaskin IB aktif dan 2 minggu vaksinasi ke 2 untuk vaksin IB Inaktif  baik kelompok kontrol maupun kelompok perlakuan ditantang dengan virus IB M-41 dengan kandungan virus 106.5 intra ocular atau intra tracheal.
  • 4-7 hari pasca tantang dilakukan tracheal swab
  • Inokulasikan tracheal swab ke allantoic sac dari telur ayam SPF berembrio
  • Inkubasi telur selama 7 hari
  • Vaksin dinyatakan memenuhi syarat jika tidak kurang dari 80% ayam yang divaksin tidak menunjukkan adanya ineksi virus IB, sedangkan ayam kontrol tidak kurang dari 80% harus mati atau timbul infeksi virus IB
  • Untuk melihat lebih jauh mengenai efek dari vaksinasi dan perlakuan tantang, maka vaksinasi dapat dilakukan pada ayam uji dengan umur masa bertelur. Vaksin dinyatakan baik apabila tidak ada pengaruh atau menurunkan tingkat produksi telur.

3. Serum Neutralisasi Test

a. Pengenceran Seed Virus

  • Siapkan 7 tabung steril yang masing-masing sudah diisi dengan 4.5 ml PBS steril.
  • Tandai tabung dengan identitas 10-1 sampai dengan 10-7.
  • Masukkan 0.5 ml Seed Virus IB yang akan dipakai sebagai virus tantang pada tabung dengan label 10-1 kocok dengan menggunakan vortex sampai merata.
  • Pipet 0,5 ml dari dari pengenceran 10-1 dan masukan  ke tabung pengenceran 10-2, lakukan step ini sampai pada pengenceran 10-7.
  • Kocok  sampai homogen
  • Untuk lei jelas silahkan baca postingan Uji Vandungan Virus IB

b. Serum  Uji (Serum dari ayam  vaksinasi)
  • Siapkan 4 tabung steril, tandai tabung dengan identitas 10-1 sampai dengan 10-4
  • Masukan  masing – masing tabung dengan  0,4  ml serum uji (serum dari ayam vaksinasi).
Tambahkan 0,4 ml pengenceran seed virus 10-4 ke tabung 10-4Tambahkan 0,4 ml pengenceran seed virus 10-3 ke tabung 10-3Tambahkan 0,4 ml pengenceran seed virus 10-2 ke tabung 10-2Tambahkan 0,4 ml pengenceran seed virus 10-1 ke tabung 10-1
  • Kocok  sampai homogen
  • Inkubasi di suhu 37oC  selama  1 jam
  • Setelah selesai inkubasi, inokulasikan dari masing masing tabung tersebut (Serum Uji) sebanyak 0,1  ml / telur masing-masing pengenceran 5 butir telur SPF umur 9-10 hari
  • Untuk Kontrol virus inokulasikan mulai 10-4 sampai dengan 10-7 dari pengenceran Seed Virus masing-masing 5 butir telur SPF
  • Inkubasi di suhu 37oC selama 7 hari, observasi setiap hari
  • Pada hari ke 7 post inikulasi semua telur baik telur yang mati  maupun yang hidup dibuka untuk dilihat PA dari embrio, PA embrio terinfeksi virus IB (positif IB) adalah :
Kurling, Kerdil, Haemoragis pada embriyo, Bulu embrio mengalami kelainan pertumbuhan (pendek dan jarang)
PA virus IB pada Embrio, Pathologi Anatomi embrio terinfeksi virus IB
  • Hitung Nilai Indek ntralisasi, rumusnya adalah :
C. NI (Neutralisasi Index) = kontrol virus - sampel uji
  • Nilai Index Netralisasi  tidakkurang 2.0  maka serum dianggap protektif terhadap IB (lulus)
  • Nilai Index Netralisasi antara 1.0  s/d  1.9 maka sampel serum dianggap dubius
  • Nilai Index Netralisasi kurang dari 1.0   maka sample serum dianggap negative.
D. Daftar Fustaka
    1. Farmakope Obat Hewan Indonesia (FOHI) tahun 2013
    2. The World Organization for Animal Health (OIE)
    Semoga bermanfaat........
    Diposting oleh No comments:
    Marcadores:

    Uji Tantang Vaksin Avian Influenza H5N1

    Infeksi virus AI pada uji tantang
    Untuk mengetahui protektivitas dari vaksin Avian Influenza (Flu Burung) H5N1 terhadap virus tantang/lapang adalah dengan melakukan uji potensi dengan metode tantang menggunakan virus yang dirokomendasikan atau dengan  virus AI isolat lapang, cara mendapatkan isolat virus AI silahkan baca "Cara Isolasi Virus Avian Influenza H5N1". Pada saat ini virus AI yang direkomendasikan sebagai virus tantang adalah AI dari Subang atau yang dikenal dengan AI SBG.
    Uji Tantang harus menggunakan isolator yang ditempatkan dilaboratorium Biosafety level 3 (BSL3) dengan tekanan udaranya (pressure) negatif shingga dapat melindungi lingkungan sekitarnya 
    Ayam yang dipergunakan untuk uji tantang menggunakan ayam SPF (spesific Pathogen Free) umur 3-4 minggu sebanyak 20 ekor dibagi menjadi 2 kelompok,10 ekor kelompok vaksinasi dan 10 ekor lainnya sebagai kontrol

    1. Vaksinasi

    10 ekor ayam di suntik masing-masing 1 dosis dengan vaksin AI sebagai kelompok vaksinasi dan 10 ekor lainnya sebagai kelompok kontrol, observasi dilakukan selama 3 minggu.

    2. Uji Tantang
    • Setelah tiga minggu (21 hari) setelah vaksinasi, tantang semua ayam dari kelompok vaksinasi maupun  kelompok kontrol dengan virus tantang (AI strain SBG) melalui intra muskular dengan kandungan virus 106.0 CLD50.
    • Sebelum dilakukan uji tantang, ambil darah semua ayam baik kelompok vaksinasi maupun kelompok kontrol  untuk dilakukan pemantauan titer antibodi. 
    • Uji tantang dilakukan di area animal BSL3 laboratoris atau isolator yang telah dioperasikan dan dipastikan berfungsi dengan baik sebelumnya.
    • Ayam dari kelompok uji dan ayam dari kelompok kontrol dengan menggunakan  isolator yang berbeda untuk memantau secara baik pengaruh total vaksin dalam memproteksi virus AI tantang dan membandingkannya dengan kelompok kontrol tanpa perlakuan vaksinasi.
    • Bersihkan/usap daerah otot dada dengan kapas beralkohol
    • Suntikkan 1 ml virus AI dengan kandungan 106.0 CLD50/ekor melalui intra muskuler. Cara menguji kanungan virus silahkan baca artikel "Cara menguji Kandungan Vairus ND"
    • Catat semua hasil pengamatan setelah 14 hari pada form observasi uji potensi, dengan melihat gejala-gejala abnormal post infeksi virus yang mungkin muncul.
    • Vaksin memenuhi syarat apabila selama masa pengamatan tidak kurang dari 90% ayam vaksinasi tetap hidup tanpa memperlihatkan gejala klinis penyakit AI, dan ayam dari kelompok kontrol tidak kurang dari 90% mati atau memperlihatkan gejala klinis khas penyakit AI serta shedding virus tidak lebih dari 7 hari
    Isolator









    3. Daftar Fustaka
    1. Farmakope Obat Hewan Indonesia (FOHI) tahun 2013
    2. The World Organization for Animal Health (OIE)
    3. FAO’s Manual on Wild Bird Highly Pathogenic Avian Influenza Surveillance : http://www.fao.org/docrep/010/a0960e/a0960e00.html
    Semoga bermanfaat .......
    Diposting oleh No comments:
    Marcadores:

    Cara Uji Kandungan Virus EDS (Egg Drop Sindrome) Menggunakan Telur Berembrio


    Bentuk telur akibat virus Egg Drop Syndrome
    Foto koleksi Poultry Indonesia
    Untuk mengetahui kandungan virus EDS (Egg Drop Syndrome) dapat dilakukan dengan cara virus tersebut diencerkan dalam larutan buffer sampai peneipisan tertentu, kemudian masing-masing pengenceran/penipisan virus  ditanam/ditumbuhkan pada telur bebek berembrio, selanjutnya telur tersebut diinkubasi di suhu 37⁰C selama 5 hari. Larutan yang biasa dipakai untuk pengenceran virus menggunakan larutan Phosphat Buffer Saline (PBS), NaCl fisiologis, cara membuat larutan PBS silahkan baca artikel Prosedur Pembuatan Phosphat Buffer Salne 

    Alat dana Bahan

    Untuk menghindari kontaminasi dari mikro organisma lain alat dan bahan-bahan yang berhubungan langsung dengan virus harus terlebih dahulu di sterilisasi. Alat dan bahan yang diperlukan adalah :
    • Biosafety Cabinet
    • Tabung reaksi 18 x 180 mm
    • Pipet steril Vol. 10 ml & 1 ml
    • Spuit 1 ml
    • Alat Pengocok (Vortex)
    • Sprayer alkohol 70%
    • Pembolong Telur (Puncher)
    • Gunting
    • Kaca plat
    • Batang pengaduk (stick gelas)
    • Single pipette 50 μl
    • Pipet tip
    • Candler
    • Sampel virus EDS (bulk)
    • 25 butir telur bebek masa inkubasi 10 -12 hari
    • Phosphat Buffer Saline (PBS)
    • Silicon rubber/paraffin
    • Kapas beralkohol 70%
    • RBC 10% (baca artkel : Cara Pembuatan RBC)
    • Tissue

    Persiapan

    Teropong (Candling) telur untuk mengetahui posisi embrio dan rongga udara, dengan menggunakan pensil beri tanda  (+3 mm) diatas rongga udara, beri nama setiap telur sesuai dengan nama sampel dan tingkat penipisannya

    Prosedur

    • Disinfeksi area kerja BSC dengan kapas beralkohol 70%
    • Tempatkan beberapa tabung reaksi di rak tabung dan beri nomor, jumlah tabung sesuai dengan kisaran titer virus EDS
    • Pipet 4,5 ml PBS dan masukan pada masing-masing tabung
    • Pipet 0,5 ml sample virus ND dan masukan kedalam tabung no 1 (10⁻¹) kocok sampai homogen dengan menggunakan vortex.
    • Dari penipisan tabung pertama, pipet 0,5 ml dan masukan kedalam penipisan berikutnya (tabung no 2) kocok sampai homogen. Lakukan step ini sampai pada penipisan terendah
    • Oles dengan kapas beralkohol disekitar  area rongga udara.
    • Dengan menggunakan pembolong telur (puncher), lubangi telur di tanda silang (+ 3 mm diatas rongga udara)
    • Inokulasikan penipisan fluida dari empat penipisan terendah sesuai dengan kisaran titer EDS pada telur bebek embrio tertunas umur 10 hari sebanyak 0.1 ml / butir telur, rute intra allantois, 5 butir setiap penipisan.
    • Inokulasikan larutan PBS pada 5 butir telur bebek berembrio tertunas umur 10 hari masing-masing 0,1 ml (sebagai kontrol)
    • Tutup lubang bekas inokulasi dengan sealent/paraffin
    • Inkubasikan pada suhu 37⁰C selama 5 hari dan observasi setiap hari dengan cara diteropong dengan lampu pijar (candler), embrio yang mati 24 jam post inokulasi dianggap kematian yang tidak spesifik ( dibuang ). Embrio yang mati sesudah 48 jam dichilling pada suhu 4⁰C
    • Pada akhir masa inkubasi telur yang tersisa dichilling di 4⁰C, minimal overnight
    Tabel Penegnceran/Penipisan virus

    Penilaian (Judgement)

    • Dengan menggunakan gunting buka kerabang telur
    • Pipet maing-masing 50 μl RBC 10%, letakan pada kaca plat (sesuai jumlah telur)
    • Pipet 50 ml cairan allantois dari masing-masing telur pada setiap penipisan, dan campurkan kedalam RBC 10%, homogenkan menggunakan stick, lap stick menggunakan tissue.
    • Goyang-goyangkan kaca selama 15 detik sambil diamati terbentuknya agglutinasi.
    • Agglutinasi dianggap positif jika terbentuk butiran-butiran warna merah (agglutinasi)
    • Hitung titer virus menggunakan metode “Spearman – Karber”
    • Perhitungan metode “Spearman – Karber” berdasarkan log 10 EID₅₀.

    Perbedaan Embrio yang terinfeksi virus IB dan kontrol
    Hasil Uji Agglutinasi pada Fluida yang Terinfeksi Virus ND

    Rumus :
    EID50    = X + 1/2  - d∑ri   atau
                                     n

                 = X + 0,5  - d    ∑ri
                                     n
    Keterangan   :           
    -   X     =  Pengenceran tertinggi (konsentrasi terendah)
    -   ∑ri   =  Total yang tidak terinfeksi (negatif/normal)
    -   n     =   Jumlah  telur/cell/mencit/ayam  yang  dipakai  pada  setip penipisan
    -   d     =   log  dari  factor  penipisan (log 10 =1)

    Contoh Hasil Penilaian VCT

    Hasil Uji Rapid Agglutinasi VCT Virus EDS (Egg Drop Syndrome)
    Pengenceran
    Positif (agglutinasi)
    Negatif
    10-6
    5
    0
    10-7
    5
    0
    10-8
    4
    1
    10-9
    1
    4
    Kontrol
    0
    5

    Perhitungannya :
    EID₅₀  = 9 + 0,5 - 5/5
              = 9,5 - 1
              = 8,5
    maka titer virus EDS (Egg Drop Syndrome) hasil dari uji kandungan virus adalah : 10⁸․⁵EID₅₀

    Definisi

    • Fluida (Bulk) adalah cairan alantois hasil panen  dari telur yang telah ditanam virus EDS
    • Telur SPF (Specific pathogen Free) adalah telur ayam yang tidak mempunyai antibodi berasal dari turunan ayam petelur yang tidak/belum pernah divaksinasi dan bebas dari penyakit mematikan.
    • Clean Egg adalah telur ayam yang yang tidak mempunya antibodi tertentu

    Pustaka

    Farmakope Obat Hewan Indonesia Jilid I (sediaan Biologik) edisi 3 tahun 2013. Direktorat Jenderal Pertenakan Departemen Pertanian Republik Indonesia

    Semoga Bermanfaat........
    Diposting oleh No comments:
    Marcadores:
    Subscribe to: Posts (Atom)