Prosedur Pembuatan Phosphate Buffer Saline (PBS)

Phosphat Buffer Saline (PBS) atau disebut larutan penyangga adalah larutan yang terdiri dari asam lemah dan garamnya yang dapat menjaga dan mempertahankan pH, Larutan PBS terdiri dari Natrium Klorida, Natrium Phosphat, Kalium Phosphat dan Kalium Klorida yang dilarutkan dengan air suling (aquades) / water for injection (WFI).  Kelompok fosfat berguna untuk mempertahankan pH.

Dalam bidang biologi dan bioteknologi larutan ini tidak bisa dipisahkan dalam penggunaanya karena PBS mempunya sifat antara lain :

• pH larutan tidak berubah jika ditambahkan dengan sedikit asam maupun basa
• pH larutan tetap konstan jika diencerkan  

Karena sifat itulah PBS biasa digunakan dalam beberapa hal :

• Uji kandungan virus/bakteri
• Pembuatan RBC
• isolasi virus AI, Isolasi Virus IB, dan isolasi virus lainnya
• Isolasi bakteri
• Pengencer bulk virus/bakteri
• Pengujian Heamglutinasi (HA-Test)
• Uji antibodi (HI-Test)
• Campuran dalam pembuatan vaksin baik dalam bentuk emulsi  maupun suspensi
• Media transport dalam pengiriman spesimen ke laboratorium.

Alat  yang dibutuhkan

-       4 pcs          Sendok Kimia

-       1 pcs          Botol gelas/Grade Screw 1000 ml

-       1 unit         Analitycal Balance

-       1 unit         Magnetic Stirrer

-       1 pcs          Magnetic Bar

-       1 unit         pH Meter

-       1 unit         Autoclave

   

Pembuatan PBS 1 liter

No	Nama bahan	Rumus Kimia	Jumlah (g)
1	Natrium Klorida	NaCl	8
2	Kalium Klorida	KCl	0,2
3	diNatrium Hydrogenphosphat	Na2HPO4	1,44
4	Kalium Hydrogen phophat	KH2PO4	0,24
5	Air destilasi / air suling /WFI	ddH2O	800
6	NaOH 0.1 N
7	HCl 0.1 N

Prosedur :

• Untuk membuat 1 liter larutan PBS, timbang semua bahan diatas dengan   menggunakan Analitycal Balance
• Masukkan ke dalam Grad Screw 1000 ml. Tambahkan 800 ml  WFI/air destilasi/air suling, Kocok/homogen dengan menggunakan magnetic stirrer selama 15 menit, tambahkan WFI/air destilasi/air suling sampai volume akhir 1000 ml.
• Cek pH PBS dengan pH meter yang sudah dikalibrasi sebelumnya.
• pH PBS harus menunjukkan 7.2 sampai 7,2 (±0.2.)
• Bila pH PBS lebih dari 7.4, maka tambahkan HCl 0.1 N.
• Bila pH PBS kurang dari 7.2, maka tambahkan NaOH 0.1 N.
• Bila pH telah sesuai kocok kembali selama 10 menit agar larutan benar-benar homogen, kemudian didistribusikan kedalam botol gelas (grade screw) volume 250 ml @ 2oo ml.
• Sterilkan PBS dengan Autoclave, suhu 121⁰ C, selama 15 menit
• Bila sudah dingin, beri label kemasan pada  botol tesebut dan simpan di refrigerator dengan suhu 2⁰ C - 8⁰ C., pemebrian label sangat penting sebagai  identitas sehingga tidak akan terjadi tertukarnya larutan pada saat pemakaian.

Contoh Label

Nama Larutan/Media	: ..............................................................
No. Batch	: ...............................................................
pH	: ...............................................................
Tanggal Pembuatan	: ...............................................................
Nama Operator pembuat larutan/media	: ...............................................................

Semoga Bermanfaat bermanfaat .............. 

Amiin .........